熒光western blot的一些建議

熒光western blotting是一種熒光標記檢測抗體直接檢測蛋白表達水平的技術。由于數字成像技術和熒光western blotting試劑的最新進展，這種方法正變得越來越流行。不太確定這個技術，開展熒光western blotting的原因。

如果你決定嘗試在實驗室開展熒光western blotting，可以使用以下小技巧來優化你的protocol和增強你的WB經驗。

提高靈敏度

?          使用高靈敏度的標簽。量子點納米球熒光二抗將幫助實現更高的靈敏度

?          如果無法檢測到目標蛋白，可以嘗試將膜干燥后再顯影，干燥可能會增加信號強度4--10倍

?          減少樣品、一抗和二抗的濃度，這樣可以最大限度地減少實驗樣品中的非特異干擾

?          換用不太強的封閉劑可以幫助增加信號強度，但這也會增加非特異信號。例如將酪蛋白稀釋到0.5倍，或使用魚或牛血清白蛋白(BSA)封閉劑。

降低非特異性吸附

?          使用酪蛋白作為封閉劑，可以最大限度地減少非特異性結合

?          如果信號很強且有很多非特異性結合，可以稀釋一抗和二抗濃度

減少背景熒光

?          使用長波長的熒光抗體(如620nm)可以大大降低膜的自發熒光。

?          使用短波長的熒光抗體(如520nm)，檢測含量豐富的靶點，如內參蛋白(GAPDH)

?          使用低熒光(LF)-PVDF膜，因為它們可以最小化背景電平(與常規PVDF膜相比，在某種程度上，硝化纖維素膜)

?          避免使用彩色ladder，盡量使用非預染或藍色預染ladder，ladder上樣盡量少