量子點熒光定量Western Blot
免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的方法。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記物標記的二抗，具有分辨率和實用性高，特異性強等優點。
目前常用的免疫印跡顯色方法有：酶促底物化學發光和近紅外熒光法，化學發光法一般采用辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗加化學發光底物（ECL）顯影，化學發光信號需要采用膠片曝光、定影等復雜操作步驟，或者化學發光成像設備進行曝光成像，顯影過程較復雜，且檢測信號容易過曝或太弱無法檢測。而近紅外熒光法發采用近紅外染料標記的二抗與膜上的一抗反應后，然后進行激光近紅外熒光掃描儀成像，克服了傳統熒光二抗檢測靈敏度較低，化學發光法操作步驟復雜、需要發光底物、容易過度曝光等缺點。但近紅外熒光染料穩定性差，實驗操作需要全程避光進行；且需要價格昂貴近紅外熒光成像儀器進行顯影。且不同的染料需要不同波長的光源激發，使得成像儀器復雜化。
量子點(Quantum dot)作為一種新型熒光無機納米晶體，具有寬的激發譜和窄的發射譜，光學穩定性高，生物相容性好等優點。量子點經過各種化學修飾之后，可以進行特異性連接，其細胞毒性低，對生物危害小，可以進行生物活體標記和檢測。連接有蛋白或二抗的量子點在免疫印跡中可以作為優良的熒光成像劑，其光穩定性強，信號穩定，適合高質量分析。單一的紫外激發光源可以激發發射波長在490 nm~680 nm范圍內的 ，在同一系統中實現多色檢測，并且利用親和素-生物素系統，放大熒光效應。
2005年，Ornberg等首次報道量子點免疫印跡技術，利用不同發射波長的量子點標記二抗檢測MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）和磷酸化的MAPK，實現在同一印跡中同時觀察到綠色和紅色條帶，并檢測到MAPK蛋白濃度與熒光強度有線性關系。該方法靈敏度高，可多重標記，光化學性能穩定，耗時短。Scholl等用傳統免疫印跡檢測神經生長因子時，檢測為10 ng，而基于量子點的免疫印跡可將檢測限降低至0.01 ng。
量子點與生物分子的偶聯技術
量子點與生物分子的偶聯技術可以歸納為以下兩種：
量子點免疫印跡的應用
目標蛋白的定性檢測
Bakalova等采用2種量子點免疫印跡模式檢測白血病K-562細胞中的TRF，Tin2和β-肌動蛋白。單模式（量子點直接偶聯蛋白）時，CdSe量子點分別直接偶聯不同濃度的抗TRF 1 抗體、抗Tin 2、抗β-肌動蛋白，“夾層模式”采用親和素-生物素系統使量子點間接與抗體連接。兩種模式下，免疫印跡均可得到不同熒光強度的條帶，待測蛋白濃度與熒光強度成正相關，且夾層模式比單模式下熒光強度更強，信號放大作用顯著，檢測結果更靈敏。
蛋白質的定量檢測
量子點免疫印跡克服了傳統免疫印跡只能做半定量分析的局限，通過建立待測蛋白濃度與相對熒光強度的標準曲線，即可實現對微量蛋白的定量分析。Kale等用量子點標記前列腺凋亡反應基（Par-4）、聚（ADP-核糖）聚合酶和β肌動蛋白抗體，特異性分析細胞核和細胞質中的蛋白質，檢測限可低至 10 pg。
蛋白-蛋白、 蛋白-DNA間互作、蛋白質-RNA相互作用后續分析
在體外，通過量子點免疫印跡判斷生物分子是否與目標物質結合，為生物分子的體內研究做鋪墊。Xu等將量子點連接小抗體片段后特異性標記膜結合蛋白(GRP78)，用免疫印跡測試量子點-抗GRP78的特異性，在紫外燈下檢測到1條熒光強度很高的紅色條帶，隨后體內研究GRP78帶動量子點-抗GRP78從細胞進入細胞質，有效地被癌細胞內化，表現出抑制乳腺癌生長的生物抗腫瘤活性。
量子點免疫印跡分析是近10年來發展起來的新技術，除了應用于蛋白質定性或定量檢測，在生物醫藥學領域中的應用也展示出廣闊的前景。其有利于推動藥物靶向系統的開發與研制，實現在活體內實時研究藥物與體內多種細胞以及細胞的多種生物分子的相互作用，更深入研究藥物的體內過程。
誠如以上概述，量子點熒光免疫印跡是蛋白質定量或定性研究、蛋白質與其他生物分子互作的熱點與創新點。如果您對這方面研究感興趣，昆道生物即將推出量子點熒光二抗，敬請期待！
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